ИФА диагностика инфекций

Иммуноферментный анализ является относительно новым методом диагностики и начал широко применяться лишь в конце прошлого столетия. Изначально с помощью ИФА изучали антигенные структуры, то есть он использовался лишь в научных целях. Затем ученые пришли к выводу, что образование специфического комплекса антиген-антитело, который обнаруживали с помощью фермента (благодаря чему метод и получил такое название), можно помочь в выявлении некоторых специфических маркеров (антител), которые возникают в ответ на определенное заболевание. Таким образом, в конце 80-х годов и начали использовать диагностику методом ИФА.

Изначально иммуноферментный анализ применяли лишь в узкопрофильных учреждениям, в основном, на станциях забора и переливания крови. Особое значение ИФА имел из-за того, что мог выявлять такую страшную и смертельную инфекцию, как ВИЧ.

Метод иммуноферментного анализа имеет широкую сферу применения. Современные лаборатории используют его, чтобы диагностировать:

  1. Опухоль. С помощью ИФА можно обнаружить специфические маркеры, характерные лишь для онкологического процесса. Метод позволяет обнаружить опухоль даже при ее минимальных размерах, когда она еще не видна на визуальных исследованиях.
  2. Гормональные нарушения. В частности, ИФА применяют для оценки гормонов щитовидной, надпочечниковой и половой желез.
  3. Наличие в организме инфекции. С помощью иммуноферментного анализа крови можно обнаружить заболевания бактериальной (сифилис, гонорея и другие), вирусной (ВИЧ, герпес, цитомегаловирус и другие) а также протозойной (малярийный плазмодий, трихомонады) природы.
  4. Наличие специфических антител, свидетельствующих о хронической или перенесенной инфекции. Патологический процесс может стихать, протекать стерто или асимптомно, но иммунная система все равно будет бороться с ним.
  5. Поражение гельминтами.

Если организм подвержен инфекционному процессу, то ИФА диагностика считается наиболее оптимальным методом исследования для определения природы заболевания. Уступает иммуноферментный анализ в точности только ПЦР.

Сущность и виды ИФА

Основой метода является связывание специфических иммунных клеток организма – антител с антигенами возбудителей инфекции. Образовавшийся комплекс определяют с помощью специального меченного фермента. Из-за того, что анализ крови методом ИФА проводится в огромном количестве направлений, существует несколько его видов. ИФА может быть неконкурентным или конкурентным в зависимости от типа воздействия компонентов в начальной стадии анализа. Вид зависит от того используются в системе лишь анализируемые соединения или присоединяются их аналоги, которые вступают в конкурирующую реакцию. С помощью неконкурентного метода выявляют вирусные инфекции (герпес, ВИЧ, гепатиты), токсоплазмоз и некоторые другие заболевания. Кроме того, существует разделение конкурентного метода на прямой и непрямой твердофазный иммуноферментный анализ. Каждый из видов отличается схемой проведения и сферой применения.

  • Прямой ИФА. Для проведения используются обездвиженные антитела, которые реагируют с антигенами. Один из них меченный, а второй нет, поэтому происходит конкуренция. Основное достоинство метода в том, что все его процессы достаточно просто автоматизировать, а количество стадий небольшое, из-за чего диагностика занимает меньше времени.
  • Непрямой ИФА. В данном методе применяют антитела специфического или вторичного характера, которые являются меченными ферментом. А на твердой фазе обездвиживают антиген. Анализ позволяет выявлять антитела к разнообразным антигенам, а также достигнуть более точного результата за счет введения реагента на разных стадиях. Однако схема проведения такого ИФА более сложная и предусматривает дополнительные звенья.

Из-за множества направлений применения ИФА было создано несколько тест-систем. Классификация основана на разнице свойств антигенов, которые используются:

  1. Лизатные системы (используется полученный культуральным методом антиген);
  2. Рекомбинантные системы (антиген получают путем его воссоздания с помощью генной инженерии);
  3. Пептидные (используется не весь антиген, а лишь его пептидные фрагменты, то есть белки).

Расшифровка анализа ИФА основана не только на выявлении специфических антител, но и на оценке их титра, так как наличие клеток иммунной системы может свидетельствовать о перенесенной инфекции, а не о заболевании. Поэтому оценивать результат следует в динамике.

Преимущества ИФА метода

ИФА метод диагностики не зря называют прорывом в лабораторных видах исследований крови. Основные преимущества иммуноферментного анализа:

  • Чувствительность не менее 90 % и выше (вероятность ошибки чрезвычайно мала);
  • Длительное хранение элементов, нужных для проведения диагностики (сокращает расходы);
  • Скорость химических реакций;
  • Достаточно минимального объема крови для точной диагностики;
  • При помощи специального оборудования все процессы могут быть автоматизированы;
  • Экономия на ценах наборов диагностики;
  • Выявление инфекционного процесса может быть даже на ранних его стадиях;
  • Метод подходит для скринингов и других массовых исследований;
  • ИФА позволяет оценивать инфекционный процесс в динамике.

Среди недостатков можно отметить лишь возможность появления ложных положительных или отрицательных результатов, особенно при такой инфекции, как ВИЧ.

Анализ ИФА на сифилис

Что такое ИФА анализ положительный, можно рассмотреть на примере некоторых, наиболее значимых инфекции, в частности сифилиса. Для исследования делают забор крови из вены натощак. Далее проводится исследование, которое позволит определить не только наличие заболевания, но и точные сроки его начала, так как при сифилисе одни антитела сменяют другие в строгом порядке. Расшифровка полученных результатов будет выглядеть примерно так:

  1. Наличие острофазовых М-иммуноглобулинов свидетельствует о продолжительной инфекции (или же об обострении хронического процесса);
  2. Выявление А-иммуноглобулинов свидетельствует о том, что инфекция обитает в организме более 4 недель;
  3. G-иммуноглобулины говорят о разгаре заболевания (иногда могут свидетельствовать о недавно перенесенной терапии).

По окраске лунок (ее наличие говорит о положительном результате) оценивают интенсивность инфекционного процесса, так как яркость цвета в прямой пропорции зависит от количества образовавшихся комплексов.

Анализ ИФА на ВИЧ-инфекцию

Диагностика ВИЧ-инфекции имеет свои особенности, связанные с прогрессированием заболевания. Анализ ИФА является стандартным для данной патологии, но проводить его следует не раньше, чем через месяц после воздействия фактора риска (переливание крови, незащищенный половой контакт и другие). Это связано с наличием слепого для диагностики инкубационного периода, который длится минимум 45 дней и максимально 6 месяцев. Именно из-за того, что он так варьируется анализ следует повторить через полгода после первого проведения. Расшифровка ИФА анализа крови на ВИЧ:

  • Положительный результат при первом исследовании (антитела обнаружены). При обнаружении специфических иммуноглобулинов следует повторить анализ с такой же тест-системой.
  • Если при повторном исследовании снова обнаружены антитела, то у человека нужно взять кровь еще раз.
  • Следующий положительный результат становится основанием для проведения анализа на высокоспецифичных тестовых системах (их берется несколько).
  • После получения положительного результата, проводится иммуноблотинг (сверхспецифичные системы) для подтверждения диагноза.

На самом деле, диагностика ВИЧ-инфекции выглядит гораздо сложнее и подразумевает наличие сомнительных результатов, отрицательных, при которых также можно установить диагноз ВИЧ. Также учитывается клиническая картина пациента. Однако именно иммуноблотинг дает основание дать заключение и поставить окончательный диагноз ВИЧ.

Использование ИФА для обнаружения труднодиагностируемых возбудителей

Некоторые сложности возникают при диагностике хламидий, которые являются внутриклеточными паразитами, а также при обнаружении цитомегаловируса. Однако ИФА диагностика инфекций позволяет их найти. Что касается хламидий, то метод позволяет обнаружить острофазовые иммуноглобулины уже через неделю после заражения, когда формируется иммунный ответ. Класс G свидетельствует о наличии инфекции и позволяет оценивать ее течение, однако иммуноглобулины остаются в организме человека длительное время, поэтому для постановки диагноза следует отследить в динамике рост титра антител, которые должны увеличиться в количестве не менее, чем в 4 раза. Только в этом случае можно говорить о заболевании. Цитомагеловирус более сложен для исследования. Первые результаты о его попадании в организм появляются не раньше, чем через месяц после заражения. Продолжительность получения положительных результатов находится в диапазоне от 4 месяцев до полугода. ИФА позволяет определить латентную фазу, первичное заражение, реинфекцию или инкубационный период.

Из-за того, что метод ИФА основан на выявлении антител, а не самого возбудителя, место нахождения инфекционного агента не имеет значения для получения положительных результатов. Это позволяет обнаруживать даже те заболевания, которые нельзя диагностировать другими методиками.

малонеплохополезнохорошоотлично, спасибо! (Оцените статью!)
Комментарии
юля

мне 27 лет помогите расшифровать ттг 2.01 т4 свобод 1.72 антитела 6.33

katerovsky

Брали анализ пцр на хламмдиоз. Был отрицательный. А у молодого человека нашли.